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PCR详细说明实验室的施工规范和装修要求

时间:2022-08-12 02:08:00 点击:470次

也称基因扩增实验PCR实验的特点是可以微量DNA大幅增加,PCR常规的分子生物学研究和实验方法,广泛应用于生物学的各个领域。比如:HIV检测、乙型肝炎、禽病、癌基因检测及诊断,DNA指纹、个人识别、亲子鉴定和法医证据、动植物检疫、动物及其衍生品检测、动物饲料、化妆品、食品卫生检测、转基因作物和转基因微生物检测等。

一、PCR实验室布局

PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区域应分开,每个工作区域都有明显的标志,不能直接连接。如果连接紧密,则需要安装物体传输窗口。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。

二、实验室各区功能及主要设备

1、试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原料必须储存在该地区,并在该地区制备所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。

对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求。

2.样品制备区:主要储存样品.核酸(RNA.DNA)提取.存储和添加到膨胀反应管和测定DNA的生成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。

本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

3、扩增区:主要进行DNA扩增。另外,已经准备好了DNA也可在本区域内添加模板(样品制备区)和主反应混合物(试剂准备区)制备反应混合物。本地区的主要设备有胀仪、冰箱、离心机、加样器等。

本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。

4、扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。

与相邻区域相比,该区域的压力梯度要求为负压,以避免产品从该区域扩散到其他区域。

三、PCR实验室通风系统及压力控制

各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。

PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

四、PCR实验室装饰

实验室围护结构应牢固、气密性好。所有阴阳角宜采用圆弧过渡,墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒。地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。

五、PCR实验室注意事项

1、几个区域的大小设置情况,试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱,空间应大一些。

2、试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器,以保证操作人员的安全。

3、PCR实验室没有严格的净化要求,可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。


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