实验室方法汇总

消毒是微生物实验技术中基本的操作技术，因此从事生产.检验人员应了解消毒的基本概念.两者之间的关系，各自的应用方法及其意义，应严格执行相关操作程序，一方面保证生产检验工作的效果，另一方面保护自身安全。

一.消毒的概念

1.消毒:是指对病原微生物繁殖体的致命作用，但不能杀死孢子等所有微生物，因此消毒不彻底，不能代替。所有用于消毒的化学物质都被称为消毒剂，所以人们通常被称为消毒剂。

2.：杀死物体中所有活微生物（包括孢子）的作用。是利用强烈的理化因素使任何物体内外的所有微生物永远失去其生长繁殖能力的措施。的目的通常是通过物理方法来实现的。

二.消毒与的关系

1.共性：杀灭微生物，控制其污染，防止其传播。

2.区别：

消毒方法

目前常用的消毒方法多采用物理方法(如干热法).湿热法.过滤法.)和化学方法(消毒剂等).抗生素)两类。

1.干热法

采用恒温干燥箱120ºC~150ºC高热，并保持90~杀灭细菌和孢子120分钟，达到目的。

主要适用于压力蒸汽器不方便，且不易被高温损坏的玻璃器皿.对不能与蒸汽接触的金属器械和物品进行。

用这种方法的物品干燥，易于储存。

酒精灯火焰燃烧也是干热的方法之一。在进行动物细胞的体外培养时，经常需要使用工作台上的酒精灯火焰来补充金属器具和玻璃器皿的口缘。

2.湿热法

压力蒸汽湿热是目前常用的方法。

它利用高压蒸汽、蒸汽环境中的潜热作用和良好的穿透力，使细菌蛋白质凝固变性，使微生物死亡。

适合布工作服.各种器皿.金属器械.胶塞.蒸馏水.棉塞.纸张和一些培养液的。高压蒸汽器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min可达到效果。

3.射线法

采用紫外线照射的方法。

紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀死各种微生物。紫外线的作用机制是通过破坏微生物的核酸和蛋白质来灭活它们。

适用于实验室空气.地面.操作台面。时间为300。min。在使用紫外线时，应注意实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有害，而且对培养物质和一些试剂也有不良影响。

4.过滤法

过滤法是通过微孔滤膜过滤液体或气体，阻挡大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒，实现。

过滤法多用于遇热易分解.变性和失效试剂.酶液.血清.培养液等。

目前常用的微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤，或玻璃细菌滤器.滤球负压过滤细菌。滤膜孔径应为0.22～0.45μm在范围内或使用较小的细菌滤膜。溶液通过滤膜后，细菌和孢子因大于滤膜孔径而受阻，并利用滤膜的吸附作用阻止小于滤膜孔径的细菌通过。

5.化学消毒剂消毒法

化学消毒剂消毒法用于物理方法的物品.空气.工作面.操作者皮肤.一些实验器皿等。

1)消毒剂分类

对杀灭微生物的能力进行分类

2)消毒剂的选择

消毒剂种类繁多，性质不同，应根据实际需要选择安全有效的消毒剂。选择时至少应考虑以下几点：

3)使用消毒剂

A.影响消毒效果的因素

影响消毒剂效率的因素很复杂，一般因消毒剂类型而异。因此，在使用各种消毒剂时，应注意以下因素

a）微生物的种类和数量

由于微生物的种类和数量不同，消毒剂的有效浓度和作用时间也不同，不同类型的病原微生物对消毒剂的抵抗力也不同。对于细菌繁殖体，革兰氏阴性菌对消毒剂的耐受性强于革兰氏阳性菌，尤其是铜绿假单胞菌；孢子的耐受性强。在化学消毒剂中，戊二醛和过氧乙酸可以杀死孢子，但其作用力不如热方法；由于种类不同，病毒对消毒因子的耐受性差异很大，亲水病毒的耐受性强于亲脂病毒；真菌对大多数化学物质有很强的耐受性，所以适合细菌的消毒剂不一定适合真菌，但真菌的耐热性一般较差。当微生物污染数量较多时，应延长消毒接触时间.增加消毒剂用量或增加消毒剂浓度。

b）温度

一般来说，消毒速度随着温度的升高而加快，其效果也相应增强。温度影响的原理是它会影响细菌表面和酶系统的活性，以及消毒剂的分子运动，增加消毒剂与细菌细胞接触的机会，从而缩短消毒时间。但温度的变化对各种消毒剂有不同的影响，如醇和酚，通常受温度的影响较小，但如甲醛.当环氧乙烷等温度翻倍时，其效果可提高十倍。

c）浓度

消毒剂的浓度应考虑其主要成分的浓度。根据不同类型消毒剂的性质，提高或降低浓度会显著影响消毒效果。一般来说，消毒剂浓度的降低需要延长相应的消毒时间，消毒剂中的有效成分在保存期内也会相应降低。

d）pH值

酸碱度常影响酸性或碱性消毒剂的电离度，改变其溶解度和分子结构，影响不同离子消毒剂的作用。在碱性环境中，细菌表面负电荷增加，阳离子消毒剂作用强。在酸性环境中，细菌表面负电荷减少，阴离子消毒剂效果好；此外pH过高或过低都会影响微生物的生长和表面物理化学状态。

e）有机物质

如果消毒环境中存在有机物，可以在微生物表面形成保护层，阻碍消毒剂与微生物的接触或延迟消毒剂的作用，可能导致微生物逐渐对药物产生适应性。这些情况会不同程度地降低消毒剂的消毒效果。例如，有机物可以中和部分消毒剂、有机物和消毒剂，形成溶解度低于原来或消毒效果弱于原来的化合物。一般来说，消毒剂中的重金属和表面活化剂受有机物的影响较大。

B.其他注意点

a）微生物对消毒剂的耐受性

一般来说，为了避免微生物对消毒剂的耐受性，许多企业轮换使用消毒剂。目前，学术界对消毒剂轮换的必要性仍存在争议，但FDA在监管引文中，消毒剂应轮换，但消毒剂的轮换使用周期应根据历史环境监测数据制定。微生物对消毒剂的耐受性低于抗生素，因为消毒剂比抗生素具有更强的作用。此外，使用高浓度消毒剂杀死少量微生物通常影响不大，因此应考虑选择合适的消毒剂来对抗不断增强的耐受性。同时，建议定期进行试验，以证明或评估从环境细菌监测中分离出来的微生物（包括已知和新类型）对环境消毒剂的敏感性。

b）规范安全使用

在使用消毒剂的过程中，人员培训和消毒剂的安全使用对其应用有很大的影响。接触消毒剂的人需要微生物.清洁操作.消毒剂的制备/使用/安全处理、废物稀释和浓缩消毒剂的培训。如果正确准备消毒剂是关键，很多消毒效果差或失败的例子都来自于消毒剂的过度稀释。此外，无菌操作过程中使用的消毒剂必须用无菌水稀释。一般建议用纯化水和较高水平的水稀释，因为水的硬度会影响一些消毒剂的功效。此外，处理中可能会产生有毒刺激性气体.腐蚀性强、浓度高的消毒剂（如杀孢子剂）应配备适当的安全防护设备，如安全眼镜.面罩.过滤气味的口罩.手套.防护服等。在使用消毒剂时，应考虑清洁剂的配合使用。清洁是去除表面颗粒和微生物.去除残留物，提高后续消毒效果，为后续消毒做好清洁准备，避免前后两种轮换消毒剂的相互作用。

6.抗生素抑菌法

抗生素抑菌法主要用于培养液，是防止微生物污染的重要手段，也是微生物污染不严重时的重要手段“急救