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实验室检测艾滋病流程

时间:2022-06-13 07:06:31 点击:756次

艾滋病实验室检测流程。

在疾病的发生和发展过程中,社会因素起着重要的作用;

中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心发布了艾滋病检测技术规范近发布了艾滋病检测技术规范,该规范称为艾滋病检测实验室红宝书,适用于艾滋病初步筛查实验室艾滋病检测技术操作的疾病控制中心和医疗机构。

让我们来看看艾滋病毒是如何在实验室检测和诊断的。

样品种类的试验项目。

1.HIV抗体检测:全血、血清、血浆、口腔粘膜渗出物、尿液及干血斑样品。

2.HIV抗原检测:全血、血清、血浆、病毒培养上清液。

3.T淋巴细胞亚群测定:EDTA或肝素抗凝全血。

4.HIV-1病毒载量,基因型,耐药检测:血浆,干血斑(DBS)。

5.定性和定量HIV核酸,基因型检测和HIV-1分离培养:淋巴细胞富集,外周血单核淋巴细胞(PBMC)和全血。

当然,血液标本仍然是实验室中常用的样本,其他的只是作为补充样本。

HIV抗体检测。

艾滋病毒抗体检测是艾滋病实验室检测的项目,在我国绝大多数初筛实验室中应用为广泛。

1.初筛方法。

(1)

ELISA法检测HIV抗体是HIV初筛实验室常用的方法。目前,检测试剂已经发展到第四代,即HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体同时在血液中检测。秉承宁可误杀千人,不漏网的革命精神,其灵敏度远高于特异性,称之为HIV抗体。

(2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)

该试验方法是近10年来发展迅速的一种新的检测方法。它使用发光或荧光底物来检测抗体或结合抗原抗体。与ELISA相比,它的灵敏度进一步提高,同时增加了检测成本和假阳性率。

(3)快速检测(RT)方法。

这种方法操作简单快捷,适合应急检查和门诊急诊检查,但其灵敏度和特异性远不如ELISA和发光法,但经济实惠,具有一定的市场影响力。主要包括明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验和免疫层析试验。

2.确认实验。

(1)免疫印迹试验(WB)

WB使用间接方法检测样品中的抗HIV-1/HIV-2特异性抗体。聚丙烯酰胺凝胶用于电泳分离不同分子量的HIV-1蛋白。经过一系列,硝酸纤维素膜显示抗体带与特异性抗原结合,从而确认抗体的存在。

(2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)

实验原理与WB法基本相同,不再重复。

HIV-1抗原检测。

1.筛选实验。

(1)酶联免疫吸附实验(ELISA法):即第四代抗原抗体联合检测试剂盒。抗体包裹在固相反应孔(管)的底部,在待测样品中,P24抗原与包裹抗体形成抗原抗体复合物,然后将HIV-1抗体与酶(HRP)标记的抗原结合,在酶标仪器上读取结果。由于同时检测抗原抗体,灵敏度大大提高,有效缩短了HIV感染的检测窗口期。但由于试剂成本高,普通筛查实验室难以推广。

(2)酶联荧光分析法(ELFA):待测样品的P24抗原与固相孔(管)中包裹的P24抗体结合,被生物素标记的P24抗体识别。临床实验室的应用前景不明朗,需要荧光检测设备,成本高。

(3)电化学发光法(ECLIA):反应管中应测样品的P24抗原、包裹抗体的磁性颗粒和发光剂标记的抗体,形成磁性微珠包裹抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。

(4)抗原抗体快速检测方法:用HIV抗体包裹被载体的快速检测方法(RT),检测灵敏度也较差。

2.中和试验。

中和试验主要是p24抗原试验的补充试验,也可以进行HIV-1RNA的定性或定量试验,以消除筛查试验的假阳性。

(1)酶联免疫吸附试验(ELISA法):待检样品应与中和剂(p24抗原的抗体)一起孵化。如果样品中存在p24抗原,中和抗体将与其结合形成复合物,而不是与固相载体上的捕获抗体结合。

(2)酶联荧光分析(ELFA):原理和检测步骤与上述酶联免疫吸附实验(ELISA法)相同,中和率≥60%,认为样品中的P24抗原真的是阳性。

(3)电化学发光法(ECLIA):原理和检测步骤与上述酶联免疫吸附试验(ELISA法)相同,中和率大于50%,认为样品中的P24抗原真的是阳性。

HIV核酸检测。

目前国内HIV核酸检测试剂主要是Taqman实时荧光PCR检测试剂,可用于检测RNA/DNA的HIV-1RNA和DNA,可用于检测血浆、血清、组织器官或血液制品。目前世界上正式用于临床诊断HIV-1急性期感染的核酸检测试剂很少,主要是美国FDA批准的Gen-Probe公司生产的AptimaHIV-1RNA核酸定性检测试剂和欧盟批准的Abbbottm2000HIV-1RNA定性检测试剂。

与临床诊断有关的检测策略及结果报告。

HIV检测阳性结果的检测过程一般经过两个阶段,初筛和复检程序。以HIV抗体检测为例,具体流程如下:

试剂1进行初步筛选,结果无反应,报告为艾滋病毒抗体阴性;如果结果有反应,就不能出具阳性报告,必须进入复检试验。对于初始筛选中有反应的样品,应使用原始试剂(或两种试剂)进行复检。如果没有反应,应报告艾滋病毒抗体阴性;如果有反应或一个有反应,则应进行补充试验(抗体确认试验和艾滋病毒-1核酸试验),并报告艾滋病毒感染需要确定。

目前,大多数临床实验室都是艾滋病初步筛查实验室,进行了常规的初步筛查实验,发现阳性结果被送往CDC或其他当地确认实验室进行确认实验。临床诊断、筛查和检测过程如下图所示:

目前,国内实验室采用初步筛查抗体+WB法确认两步法进行艾滋病毒检测和诊断,严格的人员、仪器、方法质量控制,建立了全国临床医疗机构初步筛查实验室和省市疾控中心确认实验室,基本满足艾滋病患者检测和变化监测的增长。



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